奶牛胎儿细胞多位点基因打靶的研究

• 作者: 刘东军 刘广振 唐冬生 张细权 杨东山 梁浩 蒋泓 马玉珍 龚道元
• 来源期刊: 佛山科学技术学院学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 奶牛 胎儿成纤维细胞 基因打靶 多位点 定点整合
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 农业与生物技术
• 页码范围: 39-44
• 页数: 6页
• 分类号: S823.91
• 字数: 5524字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0171.2008.02.012

摘要

利用奶牛rDNA基因间的ITS重复序列作为靶位点.对奶牛胎儿成纤维细胞进行多位点基因打靶,建立以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术,并为克隆定点转基因奶牛提供核供体.首先分离培养出奶牛胎儿成纤维细胞,并进行性别鉴定和核型分析.采用MTT比色法确定了G418和GCV正负筛选的最低有效浓度.然后通过多位点基因打靶载体转染、正负筛选获得7个表达绿色荧光的克隆细胞系,经PCR,RT-PCR和测序证实其中1个细胞系为定点整合的克隆细胞系,且GFP基因表达.