腺病毒介导的人内皮型一氧化氮合酶基因和增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达

• 作者: 孔霞 张少峰 王一平 王家宁 罗超 谭艳 郭凌郧
• 来源期刊: 郧阳医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人内皮型一氧化氮合酶 增强型绿色荧光蛋白 腺病毒载体 间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 97-101,封2-封3
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 4285字
• 语种: 中文

摘要

目的:研究腺病毒载体介导人内皮型一氧化氮合酶(human endothelial nitric oxide synthase,heNOS)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)在体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的表达. 方法:体外培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞,并对培养的细胞进行成骨、成脂肪诱导分化和细胞免疫表型鉴定;用Pme I 线性化后去磷酸化的pShuttle-heNOS-EGFP转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1 的感受态BJ 5183,使其在细菌内发生同源重组,获得阳性重组质粒pAdEasy-heNOS-EGFP.重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定正确后经PacⅠ酶切,转入AD 293 细胞,包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP.用重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP对MSCs进行转染,并用荧光显微镜及免疫荧光染色法观察转染细胞内EGFP和heNOS蛋白质的表达. 结果:pShuttle-heNOS-EGFP与pAdeasy-1在BJ 5183中成功地发生了同源重组, 得到了重组腺病毒质粒pAdEasy-heNOS-EGFP.重组质粒在AD 293细胞中包装成重组腺病毒Ad- heNOS-EGFP.经基因转染的MSCs中高表达heNOS和EGFP. 结论:采用腺病毒载体可以将外源性的heNOS基因转染至MSCs中,并得到有效表达,且携带的EGFP标记可以直观地检测靶细胞感染和外源基因的表达情况,这将为勃起功能障碍的细胞治疗提供一条新的途径.