H5N1亚型高致病性禽流感病毒NP基因在昆虫细胞中的表达及其表达产物的生物学活性

• 作者: 万春和 刘大飞 刘明 刘春国 李洪涛 杜金铃 杨涛 陈浩 齐金龙
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 核蛋白基因 昆虫细胞杆状病毒表达
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 380-385
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 4573字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.05.004

摘要

根据GenBank上登录的H5N1亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)核蛋白(NP)基因序列设计引物,通过PCR扩增出A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)毒株的NP基因片段,将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上,将筛选的阳性重组转座载体pFastBacGP67B-NP转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,构建了杆状病毒表达载体,获得了重组转座子(rBacmid-NP),在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒(rBv-NP).SDS-PAGE分析、Westernblotting检测、免疫组化分析和ELISA试验结果表明,分子质量约为54 ku的重组核蛋白得到了高效表达,该表达蛋白具有良好的生物学活性.