体内外精原干细胞介导大群生产转基因鸡

• 作者: 余飞 包文斌 吴信生 周冠月 孙国波 孙怀昌 徐琪 李碧春 赵文明 陈国宏 高波
• 来源期刊: 中国科学C辑
• 关键词: 鸡(Gallus gallus) 精原干细胞 绿色荧光蛋白基因 生物反应器
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 626-634
• 页数: 9页
• 语种: 中文

摘要

本研究以重组的绿色荧光蛋白基因为标记,采用公鸡睾丸内转染精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)和体外转染SSCs再移植的方法,探索家禽转基因新方法.同时比较了公鸡接受不同剂量外源基因的转基因效率.结果显示:(i)接受外源基因剂量分别为50,100,150和200μg/mL时,48 h后睾丸细胞显示绿色荧光的比率分别为4.0%,8.7%,10.2%和13.6%,差异显著(P<0.05).睾丸内注射外源基因第25天后,随着时间的增长,精子表达绿色荧光的百分率逐渐提高,到第70天后表达率达到高峰,且趋于稳定,4个剂量组分别为12.7%,12.8%,15.9%和19.1%.差异显著(P<0.05);(ii)第70天的睾丸冰冻切片观察,曲精细管周边均有荧光表达;(iii)F<,1>代中,56.2%(254/452)的胚盘表达绿色荧光.活鸡血样PCR检测56.5%(13/23)为阳性,Southem blot检测证明外源基因已整合到鸡基因组;F2代中,53.2%(275/517)的胚盘表达绿色荧光.活鸡血样PCR检测52.9%(9/17)为阳性;(iv)F<,1>代和F2代鸡心、肝、肾和肌肉等组织冰冻切片观察和PCR检测,绿色荧光阳性率在50.0%～66.7%之间;(v)体外SSCs转染外源基因后移植,可在受体公鸡睾丸中生长发育,正常产生精子.后代中,12.5%(8/64)的胚盘表达绿色荧光,活鸡血样PCR检测11.1%(2/18)为阳性.结果证明精原干细胞介导转基因是一种简单、高效、可大群体生产转基因鸡的有效途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李碧春		189	1267	18.0	27.0
2	陈国宏		393	3876	28.0	46.0
3	徐琪		178	1010	15.0	26.0
4	吴信生		132	1231	17.0	31.0
5	孙怀昌		138	1042	15.0	25.0
6	包文斌		132	942	16.0	25.0
7	赵文明		62	378	11.0	16.0
8	周冠月		12	116	6.0	10.0
9	高波		64	338	9.0	15.0
10	孙国波		10	22	3.0	4.0
11	余飞		11	60	4.0	7.0