抗人CD86人-鼠嵌合抗体的构建及在CHO细胞的表达

• 作者: 刘玉华 孙杰 徐耀瑜 王艳茹 程钢 胡玲玲 邱玉华 陈明心 陈永井 马泓冰
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: CD86 单克隆抗体 嵌合抗体 瞬时表达 稳定表达
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 104-109
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4935字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2478.2008.02.005

摘要

从分泌鼠抗人CD86单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:1D1)中抽提总RNA,采用简并引物,经RT-PCR扩增单抗VH和VL的DNA编码区基因.通过SMART-PCR扩增VH和VL基因相应的信号肽序列.采用基因重组技术,将单抗VH、VL基因及其相应信号肽序列,与人IgGl的CH基因、Ck链基因进行拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/1D1.转染293T细胞进行瞬时表达,采用流式细胞术分析,转染上清与L929-CD86基因转染细胞的阳性结合率为97.6%.既而转染CHO细胞,经G418筛选,获取稳定分泌嵌合抗体的基因转染细胞株(CHO-ch1D1).收集无血清培养基的培养上清,采用Protein G亲和层析柱分离纯化,经Lowr法定量.从上清中获取的嵌合抗体蛋白的得率为3.066 mg/L.经进一步间接免疫荧光及流式细胞术分析,纯化嵌合抗体与L929-CD86基因转染细胞,及Daudi细胞膜型CD86分子的阳性结合率分别为98.5%和95.7%.将嵌合抗体(终浓度为5 μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,嵌合抗体对Daudi细胞的生长具有抑制作用(P<0.05).本研究获取的嵌合抗体在CD86分子的基础和应用研究中具有重要的价值.