RNA干扰体外抑制大鼠ICOS基因的表达

• 作者: 侯勇生 傅少颖 刘洪玲 吕冰洁 崔浩 邢琳
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 可诱导共刺激因子 RNA干扰 实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎 转染 鼠
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 186-189
• 页数: 4页
• 分类号: R774|R394.8
• 字数: 3773字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5141.2008.03.007

摘要

目的 观察可诱导共刺激因子(inducible co-stimulator factor,ICOS)短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对大鼠活化T细胞中ICOS基因的沉默效应,筛选有效干扰靶点.方法 设计合成ICOS RNA寡核苷酸片段,经退火、连接等步骤克隆至线性化的pRNAT-U6.1/Neo真核表达载体上,测序鉴定.应用Lipofectamine 2000将该质粒转染活化的大鼠T细胞,荧光定量RT-PCR检测ICOS mRNA表达情况,Western blot检测ICOS蛋白表达情况.结果 成功构建了3个靶点的重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA 1、2、3,荧光定量RT-PCR和Western blot显示转染这3种重组质粒的T细胞ICOS mRNA和蛋白表达均较对照组有不同程度的下降,其中1号靶点的干扰效应最为明显.在转染后的T细胞中,其抑制率分别达到了51.3%、78.3%.结论 重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA能有效抑制大鼠活化T细胞中ICOS基因的表达,并筛选出了有效干扰靶位.RNA干扰技术有望成为研究ICOS在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中作用的有效手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔浩		94	383	11.0	17.0
2	吕冰洁		10	44	5.0	6.0
3	傅少颖		33	80	5.0	7.0
4	侯勇生		12	21	2.0	4.0
5	邢琳		6	1	1.0	1.0
6	刘洪玲		1	0	0.0	0.0