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苏云金芽胞杆菌Rpp39杀虫晶体蛋白基因的鉴定及cry2Aa12基因的克隆表达
苏云金芽胞杆菌Rpp39杀虫晶体蛋白基因的鉴定及cry2Aa12基因的克隆表达
作者:
朱军
李云艳
李平
谭芙蓉
郑爱萍
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
苏云金芽胞杆菌
鉴定
cry2Aa12基因
克隆表达
杀虫活性
摘要:
[目的]本研究的目的是分析从四川生态条件下分离的苏云金芽胞杆菌Rpp39菌株的特性,从分子水平上揭示该菌株对鳞翅目高毒力的原因;进一步从中分离克隆cry2Aa基因,并对其进行初步的表达研究.[方法]本研究主要采用扫描电镜观察、PCR-RFLP鉴定法和SDS-PAGE分析法研究菌株的特性;采用PCR直接克隆法克隆cry2Aa全长基因,并亚克隆到原核表达载体pET-30a中,构建重组表达质粒pET-2Aa,再转入受体菌E.coli.BL21(DE3)中进行诱导表达;采用室内生物测定法测定表达产物对小菜蛾和水稻二化螟的毒力.[结果]经扫描电镜观察菌株Rpp39主要产生菱形、方形和圆形3种伴胞晶体;SDS-PAGE分析表明主要产生130 kDa和60 kDa左右2种蛋白;经PCR-RFLP鉴定,该菌株含有cry1Aa、cry1Ab、cry1Ac、cry1Ia和cry2Aa五类杀虫晶体蛋白基因;1种cry2Aa类杀虫晶体蛋白全长基因被克隆,序列分析显示该基因的开放阅读框(ORF)为1902 bps,编码由634个氨基酸组成的蛋白质,氨基酸序列与Cry2Aa1蛋白同源性为99.7%,被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为cry2Aa12.重组表达质粒pET-2Aa在E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导能正常表达,SDS-PAGE电泳验证含有65 kDa表达蛋白.生物活性测定表明表达的包涵体蛋白对小菜蛾和二化螟具有杀虫活性,LC50分别为5.4 μg/mL和22.3μg/mL.[结论]菌株Rpp39及从中分离克隆的cry2Aa12基因来自四川生态条件,丰富了菌株及基因的资源,在资源积累方面具有重要意义.
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鉴定
分布
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苏云金芽胞杆菌
杀虫晶体蛋白基因
重叠延伸PCR技术
启动子
苏云金芽胞杆菌V4菌株cry杀虫基因的鉴定、表达及杀虫活性分析
苏云金芽胞杆菌
杀虫晶体蛋白
cry1Ea12基因
cry2Aa16基因
生物活性
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苏云金芽胞杆菌
cry1Dd1基因
小菜蛾
新基因
伴孢晶体
内容分析
文献信息
引文网络
相关学者/机构
相关基金
期刊文献
内容分析
关键词云
关键词热度
相关文献总数
(/次)
(/年)
文献信息
篇名
苏云金芽胞杆菌Rpp39杀虫晶体蛋白基因的鉴定及cry2Aa12基因的克隆表达
来源期刊
微生物学报
学科
生物学
关键词
苏云金芽胞杆菌
鉴定
cry2Aa12基因
克隆表达
杀虫活性
年,卷(期)
2008,(5)
所属期刊栏目
研究简报
研究方向
页码范围
684-689
页数
6页
分类号
Q78
字数
3622字
语种
中文
DOI
10.3321/j.issn:0001-6209.2008.05.020
五维指标
传播情况
被引次数趋势
(/次)
(/年)
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引文网络
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(23)
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(288)
参考文献
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苏云金芽胞杆菌
鉴定
cry2Aa12基因
克隆表达
杀虫活性
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
微生物学报
主办单位:
中国科学院微生物研究所
中国微生物学会
出版周期:
月刊
ISSN:
0001-6209
CN:
11-1995/Q
开本:
大16开
出版地:
北京朝阳区北辰西路1号中科院微生物所内
邮发代号:
2-504
创刊时间:
1953
语种:
chi
出版文献量(篇)
4459
总下载数(次)
15
总被引数(次)
53416
相关基金
国家高技术研究发展计划(863计划)
英文译名:
The National High Technology Research and Development Program of China
官方网址:
http://www.863.org.cn
项目类型:
重点项目
学科类型:
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