β-琼胶酶AgaB催化活性的定向进化

• 作者: 于文功 石超 路新枝 马怡茗 马翠萍
• 来源期刊: 高技术通讯
• 学科: 化学
• 关键词: 定向进化 易错PCR 化学诱变 酶活力 β-琼胶酶
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 资源环境与生物技术
• 页码范围: 206-210
• 页数: 5页
• 分类号: O6
• 字数: 3974字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3772/j.issn.1002-0470.2008.02.019

摘要

用体外定向进化技术提高了β-琼胶酶AgaB热稳定突变酶M446的催化活性.采用易错PCR和化学诱变法相结合的方法,构建了M446的突变体文库;利用琼胶酶降解琼胶在平板上产生水解圈的特性,建立了阳性克隆的高通量筛选体系.最终筛选得到酶活性得到提高且保持较高耐热性的突变酶M117,其酶活提高为突变酶M446的3倍.测序分析发现编码突变酶Mll7的DNA序列中有4处点突变,其中2处为同义突变,另外2处引发氨基酸替换,分别为R9K和I111V.对突变酶M117与M446的动力学常数进行了比较,发现M117的Km值降低了93.4%,Kcat/Km值提高了15倍,由此可以推断突变酶M117比活力提高的主要原因是酶与底物的亲和能力提高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马怡茗	中国海洋大学医药学院	2	2	1.0	1.0
2	路新枝	中国海洋大学医药学院	16	140	7.0	11.0
3	于文功	中国海洋大学医药学院	64	501	12.0	20.0
4	石超	中国海洋大学医药学院	5	21	2.0	4.0
5	马翠萍	中国海洋大学医药学院	1	1	1.0	1.0