应用易错PCR定向进化甘油脱氢酶

• 作者: 刘嘉 方柏山 李梓君 杨仲丽
• 来源期刊: 华侨大学学报（自然科学版）
• 关键词: 甘油脱氢酶 克雷伯杆菌 定向进化 易错聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 661-666
• 分类号: Q554+.903
• 语种: 中文

摘要

经过连续易错聚合酶链式反应(Error-Prone PCR)向克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)甘油脱氢酶基因中引入突变,并构建突变文库.依据突变体催化番红O显色的特性,采用琼脂平板法和96微孔板法相结合的高通量筛选方法,成功获得突变体gldA-74,其酶活力是亲本重组酶的2.73 倍.通过软件对突变体gldA-74酶基因和亲本重组酶基因进行分析对比,发现突变体gldA-74酶基因发生了一处点突变(A964T),该突变使一处氨基酸被取代.将亲本重组酶和进化酶的高效表达产物经Ni柱纯化后,酶学性质的测定结果表明,甘油的Km值由0.58 mmol·L-1升高至0.63 mmol·L-1,而NAD的Km值由0.74 mmol·L-1升高至0.77 mmol·L-1,并且酶的最适pH值由原来的11.5升高至12.5,而最适温度由65 ℃降至55 ℃.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方柏山	华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室	137	975	15.0	23.0
2	刘嘉	华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室	12	49	4.0	6.0
3	杨仲丽	华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室	2	4	2.0	2.0
4	李梓君	华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室	3	7	2.0	2.0