小麦花药蛋白质组双向电泳技术体系的优化

• 作者: 刘卫 叶景秀 张改生 牛娜 陈蕊红
• 来源期刊: 核农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦 花药蛋白 蛋白质提取方法 蛋白质裂解液 双向电泳技术
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 404-409
• 页数: 6页
• 分类号: S5
• 字数: 5412字
• 语种: 中文

摘要

以小麦单核期花药为材料,比较了两种不同蛋白质提取方法TCA/丙酮法和酚提取法及不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白质上样量和SDS-PAGE胶浓度等方面也进行了探索与优化.结果表明,采用TCA/丙酮提取法比用酚提取法提取的蛋白质所得的2-DE胶图谱上蛋白质点数增加,图谱背景也比较清晰;样品溶解于含有硫脲和TBP的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著提高蛋白质的溶解性,在2-DE图谱上可分辨出554个蛋白质点,比用蛋白质裂解液Ⅰ提取的蛋白多39个点.以TCA-丙酮法提取小麦花药组织中的蛋白,用蛋白质裂解液Ⅱ[7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4%CHAPS、2%TBP、65mmol/L DTT、0.2%载体两性电解质(其中0.1%pH 3～10,0.1%pH4～6)]溶解蛋白,以pH4～7线性17cm的IPG胶条进行双向凝胶电泳,在上样量为800μg,13%SDS-PAGE胶浓度下,蛋白质得到了更好的分离,2-DE图谱上可分辨出631个蛋白点,图谱质量最佳.优化后的双向电泳技术体系,适合于小麦花药全蛋白质的双向电泳分析.