转基因克隆奶山羊大量生产重组人的抗凝血酶Ⅲ蛋白质(rhATⅢ)

• 作者: 刘身庆 李狄尔 杜淼 王玉阁 袁三平 解居伦 赵雅琳 邹贤刚 郝茹 鲜建
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 医学
• 关键词: 山羊 乳腺生物发应器 转基因 克隆 重组人的抗凝血酶Ⅲ(rhATⅢ) 胎儿成纤维细胞(FFC)
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 生物制药
• 页码范围: 117-123
• 页数: 7页
• 分类号: R9
• 字数: 6279字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2008.01.019

摘要

利用转基因克隆奶山羊乳腺生物反应器大量生产重组人的抗凝血酶Ⅲ(rhATⅢ)蛋白质.其中包括:筛选出人的抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的cDNA序列;利用山羊的β-酪蛋白基因的启动区,终止信号和Enterokinase蛋白酶酶切DNA序列,构建在乳腺中特异表达rhATⅢ的表达栽体.同时在转基因载体的末端连接一个新酶素筛选基因(Neomycin).再以细胞转染、G418筛选和体细胞核移植(动物克隆)等过程,最后获得含有人的抗凝血酶Ⅲ基因的转基因克隆奶山羊.我们共获得了5个原代转基因公羊.第一只克隆羊在出生后78 d死亡,解剖表明:羊的肺部和肾脏等器官有异常.其它克隆公羊经过与崂山种母羊交配,得到转基因后代,其中两个原代转基因羊的后代母羊已成熟、所获得的奶经蛋白质电泳证明:转基因克隆羊后代奶中含有约60 kD大小的rhATⅢ糖蛋白;经Elisa检测表明:在奶中含有大量活性的rhATⅢ,在来源于两个不同克隆公羊的后代母羊奶中的rhATⅢ含量分别为0.4mg/L和3 g/L.此研究证明:转基因奶山羊可以大量地生产具有很高活性的rhATⅢ.用这种方法生产的rhATⅢ通过蛋白质提纯,制成注射针剂,将可用于人的抗凝血酶Ⅲ缺乏症的治疗、预防血栓和重大手术过程中的止血的作用等.