靶向黏着斑激酶siRNA表达载体构建及转染Tca8113细胞的沉默效应

• 作者: 刘华联 刘来奎 江宏兵 王子露 邢树忠 郑阳玉
• 来源期刊: 实用口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 黏着斑激酶 舌癌细胞 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 13-16
• 页数: 4页
• 分类号: R23-37
• 字数: 3159字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-3733.2008.01.003

摘要

目的:构建靶向黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因的小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)质粒表达载体,转染人舌癌细胞Tca8113后观察其对FAK表达的抑制作用.方法:根据siRNA的设计原则,在人FAK mRNA序列中,设计并合成2条特异性靶序列寡核苷酸及2条无关对照序列,经退火成互补双链,再克隆到pGC-silencerTM-U6/Neo真核表达载体中,构建重组体pSilencer-FAK并进行酶切鉴定;转染重组质粒至Tca8113细胞中,经G418抗性筛选,获得稳定转染细胞系;运用免疫细胞化学和Westem-blot鉴定FAK的沉默效应.结果:质粒酶切证实目的寡核苷酸片段已被克隆到pGC-SilencerTM-U6/Neo载体中;psi-lencer-FAK转染细胞后,FAK基因的表达受到明显抑制.结论:成功构建了针对人FAK的siRNA表达载体,通过转染Tca8113细胞可有效地抑制细胞中FAK的表达.