真核表达质粒pBK-Fas的构建及转染舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑瘤效应

• 作者: 何志良 孙麟 祖谷 胡芳芳 陈乔尔
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 舌肿瘤 癌,鳞状细胞 转染 基因疗法 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 437-442
• 页数: 6页
• 分类号: R739.86|R394.33
• 字数: 5204字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2009.04.008

摘要

目的 研究Fas基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑制作用,构建Fas基因真核表达质粒pBK-Fas并将其转导入舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的Fas基因治疗提供实验基础.方法 采用RT-PCR反转录成cDNA扩增Fas基因全长,亚克隆到真核表达载体pBK-CMV内,构建出重组真核表达质粒pBK-Fas,酶切鉴定并测序.脂质体法将pBK-Fas转染入Tca8113细胞,RT-PCR检测Fas mRNA表达及半定量分析,琼脂糖凝胶电泳检测Fas转染细胞凋亡,流式细胞仪检测Fas蛋白表达.通过细胞生长曲线描记和软琼脂集落形成实验研究Fas基因的体外抑瘤效应.结果 PCR扩增后的产物在约1 008 bp处出现明显的特异性条带,重组质粒pBK-Fas经酶切和测序鉴定,表明均含有大小正确的Fas基因片段.经检测Fas基因转染能提高Fas mRNA 表达水平、Fas 蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数.Fas基因转染能提高Fas蛋白的表达强度,由转染前的34.01±4.76上升到转染后的55.72±7.33,差异有统计学意义(P<0.01).Fas转染细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径.MTT法检测细胞增殖抑制率的结果显示PBK-Fas转染组 Tca8113细胞的增殖抑制作用最明显,表明Fas基因转染能增加舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制率,结果与细胞生长曲线测定(计数法)结果具有一致性.软琼脂集落形成实验结果显示,与未转染细胞相比,重组质粒转染的Tca8113细胞群体倍增时间延长,克隆形成能力降低.结论 Fas基因片段被成功插入真核表达载体pBK-Fas质粒的多克隆位点.Fas基因转染能有效的抑制体外培养的舌鳞癌Tca8113细胞的生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈乔尔	安徽医科大学口腔医学院	47	215	6.0	11.0
2	何志良	安徽医科大学口腔医学院	10	30	4.0	4.0
3	胡芳芳	安徽医科大学口腔医学院	7	14	2.0	3.0
4	孙麟	安徽医科大学口腔医学院	6	57	4.0	6.0
5	祖谷	安徽医科大学口腔医学院	3	8	2.0	2.0