shRNA表达载体介导的细胞周期蛋白E1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用

• 作者: 王江 祝文涛 袁林 郭风劲 陈剑峰 陈安民
• 来源期刊: 中国癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肾ACHN细胞 RNA干扰 细胞周期蛋白E1 细胞增殖 凋亡
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 721-727
• 页数: 7页
• 分类号: R737.11
• 字数: 4304字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3639.2008.10.001

摘要

背景与目的: 肾细胞癌中细胞周期蛋白E1(eyclinE1)的过表达与预后密切相关.为进一步验证其作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性,本研究探讨shRNA表达载体介导的cycl inE1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用.方法:针对cyclinE1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段,连接到pGenesil-1-U6载体上构建shRNA真核表达载体;将上述重组载体经脂质体转入ACHN肾癌细胞株.RT-PCR、Western印迹分析cyclinE1基因mRNA及蛋白表达抑制率;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期和凋亡细胞比率;Transwell小室体外侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力.结果: shRNA重组载体介导肾癌ACHNcyclihE1抑制效果显著(0.09±0.05),显著低于空载体对照组(0.884±0,04)及未转染组(0.904±0.03)(P<0.05).经流式细胞术测得转染重组质粒组细胞生长停滞于G1期且凋亡比率显著升高(11.154±4.00)%(P<0.05).生长曲线结果显示重组载体转染组细胞生长明显缓慢(P<0.05).Transwell及迁移实验结果提示,转染重组质粒组细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05). 结论: 肾癌cycl inE1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰所成功抑制,进而导致细胞生长、增殖以及侵袭能力受抑并诱导凋亡;本研究为探讨肾癌的RNAi治疗提供了初步实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈安民	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	315	2057	20.0	29.0
2	郭风劲	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	215	1233	17.0	23.0
3	王江	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	25	89	5.0	8.0
4	祝文涛	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	21	66	5.0	7.0
5	袁林	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	15	92	5.0	9.0
6	陈剑峰	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	12	219	6.0	12.0