西伯利亚蓼半胱氨酸合成酶基因的克隆与表达

• 作者: 刘关君 刘明坤 刘桂丰 曲春浦 杨传平 王垠 阎秀峰 魏志刚
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 生物学
• 关键词: 半胱氨酸合成酶 西伯利亚蓼 定量RT-PCR 表达分析
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1363-1371
• 页数: 9页
• 分类号: Q94
• 字数: 6033字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-9772.2008.10.019

摘要

半胱氨酸合成酶是植物半胱氨酸合成反应的关键限速酶.文中应用RACE技术从西伯利亚蓼中成功克隆了半胱氨酸合成酶基因(GenBank登录号:EU597481),命名为PcCSasel,该基因全长cDNA为1 260 bp,编码382个氨基酸.经生物信息学分析,初步确定PcCSasel的N端前16个氨基酸为信号肽,并引导PcCSasel蛋白定位于胞质,为胞质型半胱氨酸合成酶.同源序列分析表明,此蛋白与其他植物半胱氨酸合成酶成熟蛋白序列高度保守,氨基酸相似性达到90%左右.荧光定量RT-PCR分析表明,PcCSasel在西伯利亚蓼的叶、茎和地下茎中均有表达,叶中表达最高,茎和地下茎次之,在3%NaHC03胁迫过程中,该基因在叶、茎和地下茎中均在第2 d表达量最高.将PcCSasel转入酿酒酵母INVScl,结果显示培养基中半胱氨酸和菌体中谷胱甘肽含量均有显著增加,在10%NaHC03和5 mol/L NaCI胁迫下,转基因INVScl-pYES2-PcCSasel菌株的存活率明显高于对照INVScl-pYES2,证明PcCSasel基因具有耐高盐的作用.