小分子GnRH-luffinS重组嵌合毒素的制备及其细胞毒性检测

• 作者: 刘艳华 康琳 王俊红 王景林 胡瑞 赵金银 高姗 高艳丽
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: luffinS2 Ⅰ型促性腺激素释放激素 重组嵌合毒素 细胞毒性
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 328-331,372
• 页数: 5页
• 分类号: R996.1
• 字数: 3891字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2008.04.008

摘要

目的:制备以小分子丝瓜素(luffin)S2为毒性部分,以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH)为导向部分的重组嵌合毒素GnRH-luffinS,体外检测其对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:重叠PCR方法扩增GnRH-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化.纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa, A549, HepG-2, SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒性.结果:成功构建了GnRH-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为93%.GnRH-luffinS对HeLa,A549,HepG-2和SP2/0的IC50分别为67.19, 70.42, 84.44和106.25 μg/ml,而对CEF无作用.结论:重组毒素GnRH-luffinS对肿瘤细胞有一定的杀伤作用.