重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用

• 作者: 单乐群 周勇 杨安钢 杨彤涛 纪振钢 范清宇 裘秀春 许彦鸣 马保安 龙华
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: tBid 人表皮生长因子受体2 融合蛋白 骨肉瘤细胞 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 专题报道:骨肉瘤生物治疗的基础研究
• 页码范围: 105-109
• 页数: 5页
• 分类号: R738.1|R730.54
• 字数: 3829字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2008.02.002

摘要

目的:构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,并探讨其对骨肉瘤E10细胞的促调亡作用.方法:通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪(FCM)检测E10细胞膜表面HER2的表达.将抗HER2单链抗体基因e23sFv与铜绿假单胞菌外毒素PE的转膜结构域基因(PEⅡ)和tBid基因连接,构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,将其克隆入真核表达载体pCMV中构建重组pCMV-ScFv/tBid载体,转染骨肉瘤E10细胞.间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,Annexin V染色流式细胞术及TUNEL法检测E10细胞的凋亡情况.结果:流式细胞仪检测到E10细胞膜表面有HER2的表达.成功构建重组融合蛋白基因质粒 pCMV-ScFv/tBid.重组质粒转染E10细胞后,间接免疫荧光双标记染色检测到E10细胞中tBid的过表达;细胞色素C在细胞质中出现;细胞出现明显的固缩、核浓缩等形态特征.Annexin V染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高(16.1%vs 4.5%);TUNEL染色显示,E10细胞出现典型的凋亡特征.结论:重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid可以在转染的骨肉瘤E10细胞中表达,并诱导骨肉瘤细胞发生凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨彤涛	唐都医院骨科	4	23	3.0	4.0
2	马保安	唐都医院骨科	2	3	1.0	1.0
3	裘秀春	唐都医院骨科	1	2	1.0	1.0
4	单乐群	唐都医院骨科	1	2	1.0	1.0
5	纪振钢	唐都医院骨科	1	2	1.0	1.0
6	龙华	唐都医院骨科	1	2	1.0	1.0
7	周勇	唐都医院骨科	1	2	1.0	1.0
8	范清宇	唐都医院骨科	2	2	1.0	1.0