抗菌肽SMAP-29衍生物的原核表达及纯化

• 作者: 刘兴汉 张宇雯 肇晓光 董兴丽 马洪星
• 来源期刊: 哈尔滨医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗菌肽 SMAP-29衍生物 改造 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 563-567
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3731字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1905.2008.06.005

摘要

目的 利用大肠杆菌表达系统表达具有抗菌活性的SMAP-29衍生物,一步亲和层析法进行纯化.方法 化学合成经改造的抗菌肽SMAP-29衍生物,纸片扩散法检测抗菌活性后,人工并用合成抗菌肽SMAP-29衍生物基因序列,克隆到表达载体pTYB11上,转化大肠埃希菌BL-21(DE3),酶切和测序鉴定后,用异硫代β-D-半乳糖昔(isopropyl β-D-thiogalactoside IPTG)诱导表达融合蛋白.经几丁质亲和层析柱纯化.结果 化学合成的抗菌肽SMAP-29衍生物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有一定的抑菌作用,SMAP-29衍生物的编码基因按正确方向和序列插入表达载体,融合蛋白的表达量达到大肠杆菌蛋白总量的40%,几丁质亲和层析后获得了可溶性SMAP-29衍生物.结论 成功构建了以融合蛋白形式表达的抗菌肽SMAP-29衍生物大肠杆菌基因工程菌,克服了抗菌肽对宿主菌的毒性,实现了用大肠杆菌高效表达和一步亲和层析纯化,为进一步检测活性及临床应用奠定了基础.