检测NDV诱导特异性细胞免疫的ELISPOT试验方法建立

• 作者: 宋文刚 常维山 李宝全 李梅 柴家前 王海荣 郭慧君
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 新城疫病毒(Newcastle disease virus) ELISPOT IFN-γ检测
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 935-938
• 页数: 4页
• 分类号: S855.3
• 字数: 4236字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立检测新城疫病毒(NDV)诱导特异性细胞免疫的ELISPOT试验方法,实时分析NDV免疫鼠的IFN-γ水平.方法:用NDV单克隆抗体包被96孔混纤板,在反应孔中加入小鼠脾淋巴细胞和NDV刺激抗原,37℃,5%CO2培养7小时.裂解细胞,依次加入酶标二抗、底物、显色液,倒置显微镜下计数ELISPOT斑点.结果:ELISPOT试验的特异性与培养时间和刺激抗原浓度密切相关.在106/孔的脾淋巴细胞浓度下,培养时间越长、刺激抗原越多,试验的特异性越低;当培养时间为7小时,抗原量为5 μg/孔时,试验的特异性最强.ELISPOT斑点数,随细胞浓度的增加而增加,当小鼠的脾淋巴细胞浓度为106/孔时,最有利于斑点的计数,试验误差最小.结论:试验成功建立了检测NDV细胞免疫的ELISPOT方法,可用于NDV细胞免疫的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋文刚	泰山医学院免疫学教研室	78	359	9.0	14.0
2	王海荣	山东农业大学动物科技学院	26	182	8.0	13.0
3	郭慧君	山东农业大学动物科技学院	36	386	11.0	19.0
4	常维山	山东农业大学动物科技学院	187	1558	20.0	33.0
5	柴家前	山东农业大学动物科技学院	39	489	12.0	21.0
6	李梅	山东农业大学动物科技学院	7	10	2.0	3.0
7	李宝全	山东农业大学动物科技学院	29	57	3.0	6.0