转人乳铁蛋白cDNA山羊胎儿成纤维细胞系的建立

• 作者: 刘风军 张涌 张玉玲 林慧 王国华 赵明涛
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 人乳铁蛋白 山羊β-酪蛋白 EGFP报告基因 供体细胞 核移植
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 436-442
• 页数: 7页
• 分类号: S188|S185
• 字数: 4926字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.03.014

摘要

采用RT-PCR获得人乳铁蛋白cDNA,通过Long and Acute PCR扩增山羊(Capra hirous)β-酪蛋白5'端6.5 kb的调控序列,以pEGFP-C1为骨架构建乳腺特异性表达载体p6.5hLF-EGFP.脂质体介导法转染山羊胎儿成纤维细胞,G418抗性筛选3～4周后,经PCR扩增和报告基因EGFP表达检测,得到稳定整合外源基因的转基因供体细胞系;同时在稳定转染p6.5hLF-EGFP的乳腺上皮细胞系的上清中检测到重组人乳铁蛋白的组织特异性表达.这为制备高效表达人乳铁蛋白的转基因山羊乳腺生物反应器提供可靠的核移植供体细胞.