人骨髓内皮祖细胞的分离、诱导培养和扩增

• 作者: 单根法 柳瑞军 熊健 许勤 钟竑
• 来源期刊: 中国胸心血管外科临床杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮祖细胞 骨髓 细胞培养
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 113-117
• 页数: 5页
• 分类号: R813.1+1
• 字数: 4461字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨并改进从人骨髓中分离、诱导培养和体外扩增内皮祖细胞(EPCs)的方法 ,为EPCs参与基础研究和临床应用奠定基础. 方法 采用不同的细胞分离液,用密度梯度离心法从正常人骨髓中分离单个核细胞(hBMMNCs),分别培养在包被人纤维连接蛋白(HFN包被组),包被明胶(明胶包被组)和未包被(未包被组)的培养皿内,利用EBM-2培养4～7 d后出现细胞克隆集落(cell colony-forming units,CFUs),挑选内皮祖细胞样CFUs继续培养(CFUs挑选法),采用流式细胞仪检测CD34+KDR+和CDl33+KDR+双荧光阳性细胞,细胞免疫化学法检测EPCs表面标记CD133、CD34、CD31、vWF和KDR的表达. 结果 用OptiprepTM分离液可从人骨髓中更有效地分离出hBMMNCs,进而诱导获取更多EPCs并可进行体外培养扩增;流式细胞仪检测结果 显示CD133+KDR+细胞高达70.4%±5.4%,CD34+KDR+细胞高达69.1%±8.7%;HFN包被组和明胶包被组细胞生长一样旺盛,均可促进EPCs的贴壁生长,促进其生长的作用差异无统计学意义(P＞0.05),而未包被组细胞生长数量最少.培养7d的贴壁细胞表面标记CD133、CD31、vWF和KDR均呈阳性,培养14d的贴壁细胞表面标记CD34呈阳性. 结论 CFUs挑选法可以从人骨髓中成功地获取更多EPCs并在体外扩增,提出了另一种获取EPCs的高效简单方法 ,进一步拓宽了获取EPCs的方法 和范围.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单根法	上海交通大学医学院附属新华医院胸心外科	18	46	4.0	6.0
2	钟竑	上海交通大学医学院附属新华医院胸心外科	39	154	8.0	10.0
3	熊健	上海交通大学医学院附属新华医院胸心外科	5	6	2.0	2.0
4	许勤	上海交通大学医学院附属新华医院胸心外科	5	27	2.0	5.0
5	柳瑞军	上海交通大学医学院附属新华医院胸心外科	5	14	2.0	3.0