K562细胞nm23-H1基因沉默对其向巨核细胞分化的影响

• 作者: 刘格 刘秋英 张传海 张美英 熊盛 王一飞 金琳 钱垂文
• 来源期刊: 中华血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,nm23-H1 K562细胞 细胞分化 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 384-387
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3619字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-2727.2008.06.006

摘要

目的 探讨nm23-H1沉默对K562细胞向巨核细胞分化的影响.方法 采用Lipofectamine2000将靶向nm23-H1基因的RNA干扰质粒pSileneerTM 4.1-CMV-sinm23及空质粒转染K562细胞,经G418筛选建立该基因稳定下调的K562细胞(K562-sinm23细胞)及空质粒转染K562细胞(K562-siNC细胞),实时定量PCR、免疫组织化学、蛋白印迹反应等方法证实了nm23基因沉默细胞构建成功.NBT还原比色试验检测细胞分化能力.流式细胞术检测在诱导剂佛波酯作用下K562-sinm23细胞表面巨核细胞分化抗原GP Ⅱ b-Ⅲa(CD41)的表达.蛋白印迹法检测细胞在佛波酯诱导后ERK1/2磷酸化活性.结果 与K562细胞和K562-siNC细胞比较,pSilencerTM 4.1-CMV-sinm23能够沉默内源性nm23-H1 mRNA的表达,基因水平和蛋白水平的沉默效率分别达到75%和70%.经佛波酯诱导,与K562-siNC细胞比较K562-sinm细胞的分化能力明显增强(NBT还原能力A值分别为0.23±0.05和0.31±0.07).nm23-H1基冈调控K562细胞向巨核细胞分化与ERK1/2磷酸化活性增强有关.结论 成功构建了nm23-H1基因稳定下调表达的K562细胞株,并且证明nm23-H1参与了K562细胞向巨核细胞系的分化.