PCV-2分离新方法的建立及广东株全基因序列的分析

• 作者: 于海霞 宋长绪 蒋智勇 赵炳武 郝永清
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 分离 基因组
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 12-17
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.2|S858.28
• 字数: 3876字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2008.04.004

摘要

利用体外环化的猪圆环病毒2型(PCV-2)全基因的感染性,建立一种分离PCV-2的方法.根据GenBank中PCV-2的基因序列,设计合成1对扩增PCV-2全基因组的特异性引物.通过PCR方法从广东发病猪病料扩增到PCV-2全基因组片段,将该片段克隆入pMD18-T栽体,筛选获得阳性重组质粒pM-DT-YF并测序.将所测序列与GenBank中发表的PCV毒株序列进行同源性比较.将质粒pMDT-YF大量扩增,经SacⅡ酶切质粒得到PCV-2全基因组,通过T4连接酶体外环化后,脂质体介导转染PK-15细胞,盲传8代.用间接免疫荧光抗体试验(IFA)可检测到特异性荧光.将转染细胞稀释后接96孔细胞培养板,培养3 d.用荧光定量法检测各孔的PCV-2拷贝数,选择拷贝数最大的细胞扩大培养,经IFA法测定病毒滴度显著增加.结果表明,利用具有感染性的体外环化的全基因组的克隆转染PK-15细胞,并通过选择压力可获得较高滴度的具有感染性的PCV-2.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋长绪	广东省农业科学院兽医研究所	66	587	13.0	20.0
2	蒋智勇	广东省农业科学院兽医研究所	15	107	6.0	10.0
3	郝永清	内蒙古农业大学动物科学与医学学院	106	776	15.0	22.0
4	赵炳武	内蒙古农业大学动物科学与医学学院	1	0	0.0	0.0