人细胞因子受体样因子3在真核及原核细胞中的表达

• 作者: 刘力 张云 张蕾 段素素 王树蕙 赵艳 车昌艳
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人细胞因子受体样因子3 真核表达 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 27-29
• 页数: 3页
• 分类号: Q786
• 字数: 2974字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.01.009

摘要

目的:观察CRLF3蛋白在293T细胞中的表达及亚细胞定位,并在大肠杆菌中表达和纯化了重组CRLF3蛋白.方法:将真核表达载体pCMV-myc-CRLF3瞬时转染293T细胞,转染24 h和48 h后免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察蛋白表达及定位;构建原核表达质粒pGEX-4T-1-CRLF3,实现插入基因的融合表达,经GST亲合层析纯化蛋白.结果:CRLF3蛋白在293T细胞中高效表达,主要分布在细胞质和细胞膜;成功构建了表达CRLF3融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌内高效表达,纯化后得到Mr约为74 000的融合蛋白.结论:在真核细胞中过表达的CRLF3蛋白主要定位在细胞质和细胞膜;获得了重组GST-CRLF3融合蛋白,为进一步探讨CRLF3的功能奠定基础.