大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体的构建及其对HSC-T6细胞TIMP1表达影响的研究

• 作者: 乐晓华 周伯平 张红梅 徐六妹 李丽雄 王火生 陈玉丙
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 生物学
• 关键词: 基质金属蛋白酶组织抑制因子TIMP1 大鼠肝星状细胞株HSC-T6 肝纤维化 RNA干扰 慢病毒RNAi载体
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 38-41
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 1876字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4287.2008.01.013

摘要

目的 构建大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体,并观察其转染HSC-T6细胞后对TIMP1基因表达的影响.方法 根据BLOCK-It Poll miR RNAi Expression System with EmGFP要求,应用在线miRNA设计工具http://rnaidesigner.invitrogen.com/maiexpress/,针对大鼠TINP1基因(GenBank:U06179)的598位点设计、合成Oligo DNA,退火形成双链DNA后,与载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR连接,转化Top10感受态细胞,构建TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体.经PCR扩增及测序鉴定正确后,以脂质体Lipofectimine.TM2000介导转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6,24、48、72h后收集细胞,应用RT-PCR鉴定TIMP1的表达情况.结果 经PCR及测序鉴定构建的TIMP1 miRNA慢病毒RNAj载体正确;将其转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6,48 h即可见TIMP1 Mrna表达量下降,72 h检测不到TIMP1 Mrna的表达,而未转染组及转染pLacZ-miR/GFP(阴性对照)组未见此改变.结论 成功构建大鼠TIMP1 miR-NA慢病毒RNAi载体Ptimp1-miR/GFP;Ptimp1-miR/GFP使大鼠肝星状细胞株HSC-T6 TIMP1基因沉默.提示了RNA干扰可使肝纤维化形成过程中的关键因子TIMP1基因沉默,为RNA干扰技术进一步应用治疗大鼠肝纤维化模型奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈玉丙	吉林大学第二院放疗科	66	298	8.0	13.0
2	周伯平	深圳市东湖医院肝病研究所	103	572	11.0	20.0
3	王火生	深圳市东湖医院肝病研究所	33	141	7.0	9.0
4	徐六妹	深圳市东湖医院肝病研究所	36	142	6.0	10.0
5	李丽雄	深圳市东湖医院肝病研究所	17	109	5.0	10.0
6	张红梅	深圳市东湖医院肝病研究所	15	82	6.0	8.0
7	乐晓华	深圳市东湖医院肝病研究所	20	118	7.0	10.0