焦磷酸测序法检测HBV前C区/基本核心启动子突变的临床应用

• 作者: LI Xiao-feng WU Bo 信芝 吴洲清 唐健熹 姚蓝 宋家武 赖人旭 郭波
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 启动区(遗传学) 基因,病毒 突变 磷酸类 聚合酶链反应 寡核苷酸序列分析
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 临床实验诊断研究
• 页码范围: 860-863
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 3346字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1009-9158.2008.08.006

摘要

目的 建立一种新的基于焦磷酸测序技术的HBV前C区/基本核心启动子(pre-C/BCP)突变的检测方法,并验证该方法的准确性、重复性、可靠性及进行初步临床检测.方法 通过对基因库中100个HBV基因序列的比对分析,设计出专用的pre-C/BCP焦磷酸测序的PCR扩增引物及测序引物,并以标准质粒作为标准品建立其相应的检测方法.通过对标准质粒及PCR扩增产物、经Sanger测序的HBV血清及基因芯片检测结果分析,以验证本检测方法检测的标本的特异度及本方法的检测可靠性.最后对60例HBV临床血清标本进行了初步的检测.结果 本研究成功地建立了pre-C/BCP突变热点的焦磷酸测序方法.其检测结果与pre-C/BCP质粒,Sanger测序法的检测结果符合率达100%(Kappa=1.0),基因芯片检测结果的诊断符合率为91.7%.同一批血清标本的重复率达97.8%,阳性PCR产物测序的重复率100%.充分证明了本方法的准确性、重复性、可靠性.初步批量化检测60份临床标本结果表明,本方法能一次批量检出包括pre-C/BCP的单一、多位点的突变,并发现了一例少见的BCP T1758C突变.结论 本实验所建立的pre-C/BCP突变热点的焦磷酸测序方法是一种可一次性检测HBV pre-C/BCP多位点突变的高通量的检测方法.