荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1 mRNA方法的建立

• 作者: 周利苹 张文婷 张莲芬 金坚
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 荧光定量PCR 纤溶酶原激活剂抑制物-1 人微血管内皮细胞 全反式维甲酸
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 152-157
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 3918字
• 语种: 中文

摘要

为了建立用荧光定量PCR检测人微血管内皮细胞纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)mRNA表达的方法.提取人微血管内皮细总RNA,经RT-PCR获得靶基因(PAI-1)及管家基因(β-actin)的PCR产物.纯化后,作为标准品梯度稀释,采用SYBR Green I定量PCR检测,建立标准曲线.方法学考核参数为特异性、线性范围、灵敏性和重复性.分析全反式维甲酸对内皮细胞表达PAI-1 mRNA的干预效果.这种定量方法特异性好,检测的灵敏度达103拷贝,线性范围为104～1010拷贝,循环阚值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r2>0.990),批内变异≤4.93%,批间变异≤9.12%.全反式维甲酸能上调内皮细胞PAI-1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性.因此,荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1基因表达的方法有助于溶栓药物药理学的研究和新药筛选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张莲芬	江南大学医药学院分子药理研究室	32	395	12.0	19.0
2	金坚	江南大学医药学院分子药理研究室	196	1025	16.0	22.0
3	周利苹	江南大学医药学院分子药理研究室	2	4	1.0	2.0
4	张文婷	江南大学医药学院分子药理研究室	1	0	0.0	0.0