Cyclin A-Cdk2对B细胞成熟因子的体外磷酸化作用

• 作者: 何侃 李晶华 李清 金英花 高畅
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 凋亡 B细胞成熟因子 Cyclin A-Cdk2 体外磷酸化
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 765-767
• 页数: 3页
• 分类号: Q291
• 字数: 2432字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2008.09.009

摘要

目的 原核表达并纯化仅含BH3结构域的细胞凋亡调控蛋白BMF,并进行CyclinA-Cdk2特异性底物的体外磷酸化检测.方法 从HeLa细胞中扩增人源BMF基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose 4B凝胶柱亲和层析纯化.以纯化的融合蛋白GST-BMF作为底物,免疫共沉淀得到的Cyclin A-Cdk2作为酶源,并以Cdk2的已知底物Histone H1作为阳性对照,进行体外磷酸化试验.结果 BMF基因的原核表达载体构建正确,表达的融合蛋白GST-BMF约占菌体总蛋白的40%,纯化后纯度约为90%.在体外磷酸化试验中,未出现与目的 蛋白GST-BMF相对分子质量相近的放射自显影带.结论 BMF蛋白在无细胞体系中不能被Cyclin A-Cdk2磷酸化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晶华	吉林大学生命科学学院	85	759	15.0	23.0
2	李清	吉林大学生命科学学院	28	110	7.0	9.0
6	何侃	吉林大学生命科学学院	9	19	2.0	4.0
7	高畅	吉林大学生命科学学院	5	46	2.0	5.0
8	金英花	吉林大学生命科学学院	21	44	4.0	6.0