大鼠Smac基因的克隆及其在心肌细胞H9C2中的表达

• 作者: 冯星 孙志伟 李艳博 王华 郭彩霞 黄渭
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: Smac 基因转染 真核表达
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 369-373
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4427字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2008.03.004

摘要

目的:克隆大鼠促凋亡基因Smac,构建真核表达载体pcDNA3.1+-rSmac,并在心肌细胞中表达.方法:应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从大鼠肾组织中扩增到大鼠Smac基因的CDs片段,构建含Smac基因的真核表达载体pcDNA3.1+-rSmac,并将此重组质粒、空载体pcDNA3.1+、pcDNA3.1+-EGFP通过脂质体介导转染大鼠心肌细胞H9C2,荧光显微镜、流式细胞术间接检测转染效率,RT-PCR法检测外源基因的表达.结果:经测序目的基因序列与GenBank(NM_001008292)公布的结果一致,所构建的重组质粒DcDNA3.1+-rSmac经PCR和酶切鉴定所释放的片段大小与预期结果相符.荧光显微镜和流式细胞术检测,细胞转染有效,转染效率达38.36%.转染重组载体pcDNA3.1+-rSmac 48h后,H9C2细胞Smac的mRNA水平明显升高.其中,对照组Smac/β-actin为1.19,空载体组Smac/β-actin为1.31,二者之间差异无显著性(P>0.05);转染pcDNA3.1+-rSmac组Smac/β-actin为1.67,与对照组比较差异具有显著性(P<0.01).结论:克隆大鼠Smac基因成功,成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1+-rSmac,并在转染后的心肌细胞中表达,为研究Smac基因在心肌细胞凋亡过程中的调控作用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭彩霞	吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室	79	425	11.0	16.0
2	王华	吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室	63	470	10.0	20.0
3	李艳博	吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室	60	244	9.0	13.0
4	孙志伟	吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室	42	312	11.0	15.0
5	冯星	吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室	7	26	2.0	5.0
6	黄渭	吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室	3	9	1.0	3.0