猪流感病毒血凝素基因原核表达及其在间接ELISA中的初步应用

• 作者: 丁选亚 乔传玲 杨焕良 辛晓光 陈化兰 陈艳 韩庆功
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流感病毒 HA基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 10-13
• 页数: 4页
• 分类号: S852.6
• 字数: 3187字
• 语种: 中文

摘要

利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1NI)血凝素(HA)基因,克隆于pMD18-T载体进行测序.以pMD18-HA 为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORV),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切、测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Westerm-blot检测证实表达产物具有良好的免疫学活性,在间接ELISA中的初步应用表明具有良好的抗原反应性.本研究为以重组HA蛋白为抗原建立HI亚型猪流感抗体的ELISA检测方法奠定了基础.