5种虫媒病毒悬浮芯片检测方法的建立

• 作者: 刘伯华 夏玉坤 张永国 战大伟 李靖 杨保安 祝庆余 罗渊
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 虫媒病毒 悬浮芯片 检测
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 708-711
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 3331字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2008.06.024

摘要

目的 建立同时检测1～4型登革病毒、乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、森林脑炎病毒和黄热病病毒等5种虫媒病毒的悬浮芯片检测方法.方法 根据GenBank发表的上述病毒的序列,通过生物信息学分析和参考相关文献,在黄病毒属高度保守的NS5区设计属通用引物和种特异检测探针.将探针共价交联到不同的Luminex色标微球上,利用属通用引物进行RT-PCR扩增,与混合微球杂交,最后利用Luminex200仪器分析荧光强度值.结果 将平均荧光强度的判定阈值定为背景对照的两倍可以对这5种共8型病毒进行有效鉴定.通过多批次的实验,均能准确鉴定出上述5种病毒,没有出现交叉反应,且批次间的平均荧光值偏离不大,变异系数(CV)均小于8%,表明本方法的特异性和稳定性均较好.在空斑滴定病毒的基础上,对本方法的检测敏感性进行了验证,结果表明对乙脑和黄热病病毒的检测敏感性可达到1.4个PFU,对西尼罗病毒可达14个PFU.进而将本方法用于检测55份临床标本和传代标本,其检测结果和种特异RT-PCR方法相比,具有很高的一致性,而且其在混合样本的快速检测中具有显著的优势.结论 通过设计合适的引物和探针,成功建立了可同时检测和分型5种虫媒病毒的悬浮芯片方法,为疾病的诊断和预防以及流行病学调查提供了新的手段.