13种虫媒病毒基因芯片检测方法的建立

• 作者: 刘洪 康晓平 曾海攀 朱晓光 杨银辉 祝庆余 胡玉洋
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 寡核苷酸序列分析 虫媒病毒 检测
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 832-835
• 页数: 4页
• 分类号: R373.3
• 字数: 3316字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2007.08.016

摘要

目的 建立能对虫媒病毒进行属水平筛查及种水平鉴定的基因芯片技术,为虫媒病毒提供一种高通量的检测与鉴定技术.方法 从GenBank获得13种虫媒病毒的全部基因组序列,利用Clustal X和BLAST等比对软件,设计针对这些虫媒病毒所在的3个属的通用寡核苷酸探针,用于病毒的属水平筛查.然后设计针对每种病毒的特异性寡核苷酸探针,用于每种病毒的检测鉴定.寡核苷酸探针长度均为70mer,将设计好的探针与GenBank上所有病毒基因组序列进行比对,验证其种属特异性,然后进行探针合成和基因芯片制备.所有病毒在BSL-3和BSL-2实验室进行培养,待检病毒核酸通过锚定随机PCR进行扩增,经荧光染料标记后与基因芯片杂交,利用激光共聚焦扫描仪扫描后进行结果分析.结果 所检测的13种虫媒病毒均可获得种特异性及所在属的属特异性杂交信号,非特异性杂交信号不明显.分别用两种不同的病毒混合后,进行模拟混合病毒感染,也得到了相应的特异杂交信号.结论 初步建立了13种虫媒病毒的基因芯片检测技术,可用于这些病毒的属水平筛查及种水平鉴定,并且可以进行混合感染标本的检测,为虫媒病毒的检测与鉴定提供了一种新的手段.