鼠抗人肥大细胞类糜蛋白酶N端片段抗体的制备与鉴定

• 作者: 梁晓东 陆田田 陈章权 黄震
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肥大细胞 糜蛋白酶 抗体 制备
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1865-1867
• 页数: 3页
• 分类号: R9
• 字数: 3496字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2008.11.005

摘要

目的:在大肠杆菌中表达人肥大细胞类糜蛋白酶(hMCC)N端片段(hMCC-N),并制备其鼠源性多克隆抗体.方法:通过PCR法扩增hMCC-N端基因片段,将其克隆至pMAL-c2x原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Amylose树脂亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠抗hMCC-N端片段多克隆抗体.并以间接ELISA测定抗体效价,以Western blot鉴定抗体的特异性.结果:PCR扩增得到360 bp的hMCC-N端基因片段,克隆入表达载体pMAL-c2x,构建了与标签蛋白麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体pMAL-c2x/hMCC-N,融合蛋白在大肠杆菌中得到了稳定表达,并经亲和层析,纯化出可溶性的重组蛋白,用其免疫小鼠,获取了鼠抗hMCC-N端片段的多克隆抗体,ELISA结果显示效价达1:12 800,Western blot分析表明该抗体能特异结合hMCC.结论:成功地制备了效价高、特异性较强鼠抗hMCC-N端片段抗体,为进一步建立hMCC的ELISA检测方法打下了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈章权	广东医学院临床免疫学教研室	33	114	6.0	9.0
2	陆田田	广东医学院临床免疫学教研室	12	42	4.0	6.0
3	黄震	广东医学院临床免疫学教研室	17	91	6.0	9.0
4	梁晓东	广东医学院临床免疫学教研室	14	35	3.0	5.0