西伯利亚百合病毒RNA提取及RT-PCR方法的比较与优化

• 作者: 丁文龙 李巧峡 赵庆芳 韩静 马平霞
• 来源期刊: 北方园艺
• 学科: 农学
• 关键词: 西伯利亚百合 RNA提取 病毒检测 RT-PCR
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 201-204
• 页数: 4页
• 分类号: S682.2+9
• 字数: 2980字
• 语种: 中文

摘要

在对感染西伯利亚百合的CMV、LSV、LmoV 3种病毒的检测上,对4种常见的RNA提取方法及影响RT-PCR体系的因素进行了比较研究.改良优化了的RNA提取方法,不需用DEPC水处理和高温烘器皿,省去液氮研磨过程,采用该法从百合叶片中提取总RNA,整个过程及后继反应均不需使用RNasin,降低了成本,同时提取的RNA质量高,适于后期RT-PCR的检测,更适合于百合幼嫩叶片和试管苗RNA的提取.运用一步法,建立了CMV、LSV、LMoV 3种病毒的RT-PCR优化体系,最优反应体系为:M-MLV 5×Reaction.Buffer 1 μL、10×PCR buffer0.5 μL、2.5 mM dNTPs(each)0.8 μL、10 pmol/μL下游引物0.2 μL、10 pmol/μL上游引物0.2μL、M-MLVRT 200 U/μL 0.1 μL、2.5 U/μL Taq polymerase 0.1 μL;0.4 μL感病材料RNA提取液,剩余部分用无菌双蒸水补足,使反应体系达到10μL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵庆芳	西北师范大学生命科学学院	75	1098	18.0	29.0
2	李巧峡	西北师范大学生命科学学院	46	448	13.0	19.0
3	丁文龙	西北师范大学生命科学学院	6	35	3.0	5.0
4	马平霞	西北师范大学生命科学学院	3	16	2.0	3.0
5	韩静	西北师范大学生命科学学院	3	28	3.0	3.0