细胞死亡调控基因GRIM19重组腺病毒的构建及在恶性胶质瘤CHG-5细胞中的表达

• 作者: 唐文渊 姚声涛 曾昭淳 黄轶
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: GRIM19 腺病毒 胶质瘤细胞 CHG-5
• 年，卷（期）: 2008,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2194-2197
• 页数: 4页
• 分类号: R394-33|R394.3|R730.264
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2008.23.011

摘要

目的 构建细胞死亡调控基因GRIM19 (genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19) 重组腺病毒载体,观察GRIM19对病毒包装细胞是否具有细胞毒作用,并验证其对脑胶质瘤CHG-5细胞的感染效率.方法 采用PCR方法分别将GRIM19以及EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV, 在BJ5183(pAdeasy)菌内同源重组,筛选阳性克隆,酶切测序鉴定,线性化后转染293T细胞进行包装、扩增、纯化,PCR检测病毒上清,TCID50法测定病毒滴度并感染CHG-5细胞后Western 免疫印迹法验证GRIM19蛋白表达.结果 连接重组后经酶切和测序法筛选出pAd-GRIM19;转染293T包装细胞,观察到绿色荧光蛋白(GFP) 明显表达,细胞生长状态良好,未见明显细胞毒作用.Ad-GRIM19及Ad-EGFP 初纯病毒经氯化铯梯度离心纯化最终获得约5×1010 U/ml与8×1010 U/ml滴度的重组病毒;将其体外感染胶质瘤CHG-5细胞,均能达到90%左右的感染率,Western 免疫印迹法表明Ad-GRIM19感染组GRIM19蛋白表达明显升高.结论 成功构建了携带GRIM19基因的重组腺病毒,为体内外进一步研究GRIM19对脑胶质瘤的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐文渊	重庆医科大学附属第一医院神经外科	227	1072	15.0	19.0
2	黄轶	重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室	9	14	2.0	2.0
6	曾昭淳	重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室	53	249	10.0	13.0
7	姚声涛	重庆医科大学附属第一医院神经外科	8	32	3.0	5.0