人重组TGF-β R Ⅱ亲和核酸筛选方法的建立

• 作者: 刘韧 朱旭东 谢琳 贺翔鸽 陈彩宇
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: SELEX 人重组TGF-βRⅡ 先导序列
• 年，卷（期）: 2008,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2168-2171
• 页数: 4页
• 分类号: R341|R394-33|R394.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2008.23.004

摘要

目的 通过筛选转化生长因子-β受体Ⅱ(TGF-β R Ⅱ)亲和核酸,探寻拮抗TGF-β活性的新方法.方法 以ssDNA 5′-TAATACGACTCACTATAGGGAGGACGATGCGG-N60-CAGACGACTCGCCCGA-3′为模板,体外转录获取初始RNA随机库;以人体外重组TGF-β R Ⅱ为靶目标蛋白行SELEX实验,共进行8轮循环筛选.通过膜结合实验监测筛选所得RNA富集库对TGF-β R Ⅱ亲和性的进化状态,凝胶阻滞实验检测亲和核酸序列与TGF-β R Ⅱ的结合强度.结果 随着筛选进行,RNA富集库沿着与靶蛋白TGF-β R Ⅱ亲和性加强的方向进化;从第8轮富集库中分离出两类优势序列,序列A和序列B.膜结合实验显示序列A、B对TGF-β R Ⅱ有明显的亲和性,但凝胶阻滞实验显示序列A、B均无与蛋白结合的阻滞带出现.结论 筛选所得序列A及B 与靶蛋白TGF-β R Ⅱ的亲和性及特异性还不理想,但先导序列A及B的获得为通过后SELEX技术进一步寻找最佳结合序列奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贺翔鸽	第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科	123	637	14.0	18.0
2	谢琳	第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科	28	154	6.0	11.0
3	刘韧	第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室	24	215	6.0	14.0