转录因子E2F-1 siRNA表达质粒的构建及对胃癌MGC803细胞的沉默效应

• 作者: 唐振勇 尹永硕 崔建华 李雷 王长青 肖强 谢玉波 马玉林
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 胃癌MGC803细胞 E2F-1 重组表达质粒
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 175-178
• 页数: 4页
• 分类号: R735.2
• 字数: 2641字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-930X.2008.02.004

摘要

目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响.方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接人经BamH I和Hind Ⅲ双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo表达质粒,并做酶切及测序鉴定.用脂质体把重组质粒转染至细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR)及蛋白印迹(western blotting)技术分别检测E2F-I mRNA及蛋白表达.结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-l siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因mRNA及蛋白表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86.4%、86.1%和81,5%、79.6%.结论:pSilencer4.1一E2F-l重组质粒能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础.