人VIGILIN N端融合蛋白的表达及亚细胞定位

• 作者: 张朝良 杨文理 蒋磊 覃扬 谢晓砚 魏玲
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人VIGILIN 融合蛋白克隆 原核表达 多克隆抗体 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 185-189
• 页数: 5页
• 分类号: R392.1
• 字数: 3718字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2009.02.001

摘要

目的 原核表达人VIGILIN N端基因,制备抗人VIGILIN的多克隆抗体,对人VIGILIN作亚细胞定位.方法 用PCR扩增人VIGILIN基因N端,克隆到表达载体pGEX-4T-2中,并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达.产物经 Glutathion Sepharose 4B纯化后免疫新西兰白兔制备抗人VIGILIN N端融合蛋白抗体,采用ELISA和Western blot鉴定抗体的效价及特异性.通过细胞免疫荧光染色,观察VIGILIN在细胞中的分布.结果 在28 ℃、1 mmol/L IPTG诱导3 h的最优条件下成功表达GST-VIGILIN N端融合蛋白,抗体ELISA滴度为1:16000,Western blot证实抗体特异性较高,VIGILIN在细胞质和核中均有分布,核中的分布集中在核膜内侧和靠近DAPI染色显著的区域. 结论 成功表达人VIGILIN N端融合蛋白和制备兔抗人VIGILIN抗体,并应用于亚细胞定位,为研究人VIGILIN的性质和功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	覃扬	四川大学华西基础医学与法医学院	27	139	7.0	10.0
2	张朝良	四川大学口腔疾病研究国家重点实验室	20	83	5.0	8.0
3	杨文理	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	7	27	3.0	5.0
4	魏玲	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	19	69	3.0	7.0
5	蒋磊	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	8	18	2.0	4.0
6	谢晓砚	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	4	9	2.0	2.0