慢病毒介导bcr/abl基因RNAi对白血病K562细胞生物学特性的影响

• 作者: 吴丽贤 吴枝娟 许建华 黄秀旺
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 白血病细胞 bcr/abl基因 慢病毒 稳定转染
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 145-150
• 页数: 6页
• 分类号: R733.72|R730.54
• 字数: 5235字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2009.02.009

摘要

目的:研究慢病毒介导RNAi致bcr/abl基因长期沉默对K562白血病细胞各种生物学特性的影响. 方法:构建含bcr/abl RNAi序列的pNL-B/A-EGFP慢病毒重组质粒载体并包装病毒,感染K562细胞,挑取稳定转化的克隆(B/A-K562).Real-time PCR及Western blotting验证干扰效应;锥虫蓝染色、集落形成实验检测细胞增殖能力变化;联苯胺染色观察细胞分化;ELISA法检测酪氨酸激酶活性;AO-EB染色观察细胞凋亡;比色法检测Caspase-3、Caspase-9活性;以上检测均以K562细胞和转染空质粒EGFP-K562作对照. 结果:成功构建bcr/abl基因RNAi稳定转染的B/A-K562细胞, Real-time PCR及Western blotting证实B/A-K562细胞中bcr/abl mRNA及P210bcr/abl蛋白含量明显下调.bcr/abl基因稳定下调后,K562细胞倍增时间明显延长(37.1 vs 20.4、23.3 h)、集落形成能力减弱(P<0.01),K562细胞向红系分化,酪氨酸激酶活性下降(P<0.01),自发凋亡率显著提高(P<0.01),细胞中Caspase-3(P<0.05)及Caspase-9(P<0.01)活性明显提高.结论:慢病毒介导的RNAi能实现bcr/abl基因长期沉默,从而抑制K562细胞恶性增殖,诱导其分化及凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许建华		1	6	1.0	1.0
2	黄秀旺		1	6	1.0	1.0
3	吴丽贤		1	6	1.0	1.0