bcr／abl基因特异性小干扰 RNA 对 K562细胞增殖凋亡和 SH2肌醇磷脂酶基因表达的影响研究

• 作者: 刘小军 尚银涛 杨敬慈 杨琳 潘玉夏 王兴哲 王茜 罗建民
• 来源期刊: 中国全科医学
• 关键词: 白血病 基因, bcr/abl RNA, 小分子干扰 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2015,（24）
• 所属期刊栏目: 论 著 Original Research
• 页码范围: 2934-2938,2945
• 页数: 6页
• 分类号: R733.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2015.24.013

摘要

目的：通过小干扰RNA （ siRNA）沉默K562细胞bcr／abl基因使SH2肌醇磷脂酶（ SHIP）基因表达增加，探讨SHIP基因缺失对K562细胞增殖凋亡的影响及机制。方法构建bcr／abl基因的化学合成siRNA，并转染到K562细胞，分为转染特异性siRNA实验组、转染非特异性siRNA对照组、空白对照组。 Western blotting法检测转染后K562细胞p210表达量，实时荧光定量PCR （ FQ-RT-PCR）检测各组细胞中SHIP mRNA表达量； Western blotting法检测SHIP、磷酸化蛋白激酶B 308（p-Akt308）和磷酸化蛋白激酶B 473（p-Akt473）的表达量； MTT比色法检测K562细胞增殖率；流式细胞仪检测K562细胞凋亡率；酶联免疫吸附试验（ ELISA）法检测核因子（ NF）-κB活性。结果转染特异性siRNA实验组K562细胞p210表达量、 p-Akt308表达量、 p-Akt473表达量较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低， SHIP mRNA表达量、 SHIP表达量、细胞凋亡率较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组升高（P＜0.05）；空白对照组与转染非特异性siRNA对照组K562细胞p210表达量、 SHIP mRNA表达量、 SHIP表达量、 p-Akt308表达量、 p-Akt473表达量、细胞凋亡率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。第1天、第3天、第5天转染特异性siRNA实验组K562细胞增殖率较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低（P＜0.05）；空白对照组与转染非特异性siRNA对照组K562细胞增殖率比较，差异无统计学意义（ P＞0.05）。第3天、第5天转染特异性siRNA实验组NF-κB活性较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低（ P＜0.05）；空白对照组与转染非特异性siRNA对照组NF-κB活性比较，差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论 SHIP基因表达受bcr／abl基因的调控， SHIP表达缺失可能是K562细胞过度增殖和凋亡减少的重要因素。