采用荧光定量RT-PCR法检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道

• 作者: 孔庆暖 张七一 张亚青 黄维清
• 来源期刊: 心脏杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 荧光定量 HCN基因 心脏
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 457-461
• 页数: 5页
• 分类号: R361.1
• 语种: 中文

摘要

目的 建立用SYBR Green荧光染料检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN4)的实时定量RT-PCR方法.方法 提取窦房结细胞的总RNA,反转录成cDNA后,应用RT-PCR法检测HCN4的表达,通过琼脂糖凝胶回收PCR产物并构建重组质粒,用梯度稀释的质粒模板建立荧光定量RT-PCR法检测HCN4的标准曲线,并检测心脏组织中HCN4的表达水平.结果 成功构建了质粒重组子,并建立用SYBR Green荧光染料在RNA水平检测HCN4通道的标准曲线,相关系数为0.997重复6次实验组内和组间变异系数均<1.0%.心脏组织中窦房结HCN4表达量最高,心室表达量最低.结论 基于SYBR Green荧光染料建立的定量RT-PCR体系敏感性高,线性范同广,重复性好,可快速准确地检测HCN4的表达.