不含氨基末端的PIF1解螺旋酶的纯化和初步功能研究

• 作者: 顾永清
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: PIF1解螺旋酶 蛋白纯化 ATP酶
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 272-275
• 页数: 4页
• 分类号: Q504
• 语种: 中文

摘要

目的 从分子水平阐述人类PIF1解螺旋酶的生理功能,纯化只含有解螺旋酶模序,不含N-末端的PIF1蛋白--PIF1△N,并对其生物化学活性进行检测.方法 以Hela细胞的cDNA文库为模版,PCR扩增得到PIF1的540～1 923的cDNA序列,在cDNA的5′端引入六聚组氨酸标签后插入pET20b表达载体,得到重组质粒pET20-PIF1△N.通过共转化此重组质粒和一个编码稀有rRNA的质粒,PIF1△N蛋白在大肠杆菌中得到表达.在4 ℃通过一系列亲和层析柱,用高效液相纯化系统纯化了PIF1△N蛋白,并检测其生物化学活性.结果 从Hela 细胞的cDNA文库中克隆了PIF1蛋白的540～1 923的基因片段,使其在大肠杆菌中成功表达.建立了纯化PIF1△N蛋白的亲和层析方法, 并检测了其ATP酶活性.结论 不含N-末端的PIF1蛋白-PIF1△N,具有依赖镁离子和DNA的ATP酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾永清	新疆石河子大学医学院	3	4	1.0	2.0