Taqman-MGB双重探针PCR技术检测含89K毒力岛猪链球菌2型

• 作者: 姚萍萍 张政 徐宝祥 朱水荣 杨婷婷 王志刚 金大智
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪链球菌2型 双重荧光定量PCR MGB探针 16S rDNA基因 89K毒力岛
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 434-438
• 页数: 5页
• 分类号: R378.1
• 字数: 3992字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2009.05.009

摘要

目的 建立同时检测猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种特异性16S rRNA及其89K毒力岛基因的SS2中国毒力株双重荧光定量PCR方法 .方法 利用SS种特异性16S rRNA和89K毒力岛基因的特异性序列设计引物和MGB探针.优化荧光定量PCR反应条件和反应体系,并对21株猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)、18株其它链球菌、9株葡萄球菌、5株其它菌株进行检测,验证该方法 的特异性、敏感性、重复性.结果 该技术的种特异性16S rRNA及其89K毒力岛两基因检测灵敏度分别为6个拷贝/反应(或12cfu/mL)及27拷贝/反应(或58cfu/mL);重复性实验,变异系数为0.30%～2.11%;从菌株核酸的提取至检测完成仅需2h左右.用该方法 对有关菌株进行考核,21株SS2菌检测结果 均为SS种特异性16S rRNA基因阳性,其中15株含有89K毒力岛的SS2菌株的89K毒力岛基因检测均阳性;而非SS菌株的16S rRNA和89K毒力岛基因检测结果 均为阴性.对49份呼吸道咽拭子、血液应急样本等进行实际考核,有2份血液样本16S rRNA基因阳性,其中1份血液样本89K毒力岛基因阳性.结论 本次建立的TaqMan-MGB双重探针荧光定量PCR方法 特异、快速、敏感,可特异性鉴定SS2中国毒力株(含有89K毒力岛),区分SS与非SS菌以及是否含有89K毒力岛基因,该方法 的建立将有益于目前针对猪链球菌2型中国毒力株快速定量检测,以及疑似猪链球菌病患者病原的早期甄别、猪链暴发疫情调查及猪群暴发或带菌调查与评估等.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王志刚		22	299	7.0	17.0
2	朱水荣		59	269	10.0	12.0
3	徐宝祥		33	265	9.0	15.0
4	张政		65	309	10.0	13.0
5	金大智		25	68	5.0	6.0
6	杨婷婷		19	143	7.0	11.0
7	姚萍萍		2	11	2.0	2.0