天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白的原核表达、纯化与发酵

• 作者: 万一 孙晓宇 张月娟 李玥 沈俭 沈卫荣 王小霞 陈锐 韩丽萍
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 天蚕素B 表皮生长因子 融合蛋白 原核表达 发酵
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1075-1079
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白,并进行纯化和发酵.方法 全基因合成带有凝血酶切割位点的天蚕素B和表皮生长因子融合基因.克隆人pET22b(+)-X表达载体中.构建重组质粒pET22b-Cecropin B-EGF,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta-gami2(DE3),经IPTG诱导后.进行SDS-PAGE及Western blot分析.镍离子亲和层析纯化融合蛋白并复性后,对其促表皮生长活性进行测定,最后在5 L发酵罐中进行发酵.结果 酶切及测序结果显示,融合蛋白基因已克隆入pET22b(+)-X表达载体中;SDS-PAGE分析显示,天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白在Rosetta-gami2(DE3)宿主菌中得到了有效表达,表达量约占全菌总蛋白的30%;Western blot分析显示,表达产物可与表皮生长因子单克隆抗体特异结合;融合蛋白的表达形式为包涵体;纯化、复性后的融合蛋白具有促BALB/c 3T3细胞生长的活性,在5 L发酵罐中进行发酵,1次可收获菌体约60 g.结论 已成功地在大肠杆菌Rosetta-gami2(DE3)中表达了天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白,为研究具有抗菌和促伤口愈合的双功能药物奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈卫荣		27	105	5.0	9.0
2	孙晓宇		36	48	3.0	5.0
3	韩丽萍		16	90	5.0	9.0
4	张月娟		12	34	3.0	5.0
5	万一		37	127	7.0	10.0
6	王小霞	第四军医大学生物技术中心	37	108	7.0	8.0
7	沈俭		15	222	9.0	14.0
8	陈锐		18	86	5.0	9.0
9	李玥		3	5	2.0	2.0