猪胸膜肺炎放线杆菌半套式PCR检测方法的建立及应用

• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 胸膜肺炎放线杆菌 半套式聚合酶链式反应 apxⅣA基因
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 790-795
• 页数: 6页
• 分类号: S852.619|Q503
• 字数: 6197字
• 语种: 中文

摘要

根据1型胸膜肺炎放线杆菌apx Ⅳ A基因3'端序列设计3条引物,建立了检测猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的半套式PCR方法.筛选了该方法的最佳反应条件,并采用该方法进行临诊检测,比较了不同处理临床样品的检测结果.结果表明,该方法能检测出所有供试血清型APP,不能从猪上呼吸道常见细菌基因组DNA中扩增出条带,特异性好;最低DNA检出量为16.5 fg,其灵敏性是常规PCR方法的1 000倍;重复性试验结果表明,该方法稳定可靠.应用半套式PCR方法检测临床样品,检出率显著高于细菌分离鉴定;样品保存方法和核酸抽提方法能影响阳性样品的检出率.