坏死梭杆菌白细胞毒素基因SH片段的克隆与表达

• 作者: 冯书章 冯凯 刘晓颖 姚志利 张秀华 王克坚 王秀东 赵利芳 陆伟 陈立志
• 来源期刊: 特产研究
• 学科: 农学
• 关键词: 坏死梭杆菌 SH 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 14-18
• 页数: 5页
• 分类号: S855.1+2|Q786
• 字数: 3012字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4721.2009.01.004

摘要

坏死梭杆菌白细胞毒素是坏死杆菌病的主要致病因子,白细胞毒素基因(lkt)是其编码基因.以分离到的国内牛源坏死梭杆菌FN(A)菌株F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增白细胞毒素基因sH片段,克隆至pMD18-T载体上,以BamH I和HindⅢ酶切的目的片段sH与相应酶切的pET32a载体连接构建pET32a-sH重组表达质粒,经转化E coli BL21(DE3)后用IPTG进行蛋白诱导,SDS-PAGE检测重组蛋向表达情况.结果表明:扩增基因序列大小为1800 bp,SDS-PAGE检测重组蛋白有效表达,表达得到大小为80.2 kDa的目的蛋白,采用镍柱亲和层析方法纯化SH重组蛋白,获得了纯度达95%的重组蛋白;经Western-blot证实,该蛋白对抗坏死杆菌阳性血清具有反应活性.