高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒感染猪外周血单核细胞cDNA文库的构建

• 作者: 宋淑萍 张永欣 李曦 李海忠 柴政 符芳 肖晶 蔡雪辉
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪生殖与呼吸综合征病毒 外周血单核细胞 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 669-673
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 3397字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.08.003

摘要

为应用CloneminerTM cDNA Library Construction Kit构建高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪的外周血单核细胞cDNA文库,以1×105TCID50PRRSV肌肉接种健康猪,攻毒后第3、5、7、9、14、21及28 d分别采集感染猪外周血,分离单核细胞,提取总RNA、mRNA,以mRNA为模板,通过引物Biotin-attB2-Oligo(dT)、SuperScript.ⅡRT合成5'末端具有attB1接头的cDNA.用柱层析方法纯化cDNA,纯化后的cDNA与pDONRTM222载体进行BP重组,于大肠杆菌DH10B转化,进行文库容量测定.结果表明,构建的高致病性PRRSV感染猪外周血单核细胞cDNA文库的库容量为1.36×107CFU,平均插入片段长度大于1 200 bp,重组率为94.3%,为进一步从文库中筛选未知细胞因子及相关基因提供了有效的工具.