体外研究人LOX-1受体功能的细胞模型建立

• 作者: 尹岚 徐婷 戴亚蕾 杨红 田菲 陈春霞
• 来源期刊: 同济大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: LOX-1 基因克隆 真核表达 动脉粥样硬化
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 14-19
• 页数: 6页
• 分类号: R363.2
• 字数: 4031字
• 语种: 中文

摘要

目的 研究LOX-1受体在早期动脉粥样硬化中的作用,建立体外LOX-1高表达细胞模型,用于探讨LOX-1与Ox-LDL的相互作用及参与泡沫细胞形成的机制.方法 根据人类cDNA文库设计引物,采用巢式PCR技术用人单核细胞转化的巨噬细胞中扩增出LOX-1完整编码区,克隆至pEGFP-C1重组真核表达载体,经测序证实后,用脂质体转染法转染至293T细胞,采用RT-PCR鉴定外源基因的表达,倒置荧光显微镜检测质粒转染效率和融合蛋白的细胞膜上定位情况,流式细胞技术检测EGFP-LOX-1融合蛋白表达情况以及其对Ox-LDL的结合能力.结果 pEGFP-LOX-1重建质粒经测序证实克隆的LOX-1序列完整,插入方向正确,转染后实验组LOX-1 mRNA大量表达,融合蛋白正确定位在细胞膜表面,并显示结合配体Dil-Ox-LDL的功能提高到6.3倍.表明所克隆的LOX-1受体具有特异性结合Ox-LDL的功能,从而建立了高表达LOX-1受体的细胞.结论 成功克隆人类LOX-1基因,使其在293T细胞中高度表达并获得了相应的功能,为进一步研究LOX-1提供有利工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨红	同济大学医学院免疫学教研室	10	97	5.0	9.0
2	戴亚蕾	同济大学医学院免疫学教研室	20	121	6.0	10.0
3	徐婷	同济大学医学院免疫学教研室	11	61	4.0	7.0
4	田菲	同济大学医学院免疫学教研室	7	43	4.0	6.0
5	陈春霞	同济大学医学院免疫学教研室	9	10	2.0	2.0
6	尹岚	同济大学医学院免疫学教研室	7	14	2.0	2.0