分枝杆菌噬菌体D29裂解酶基因的表达与鉴定

• 作者: 于龙 李劲松 杨文慧 温占波 胡凌飞
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 裂解酶 分枝杆菌噬菌体D29 大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 113-116
• 页数: 4页
• 分类号: R378
• 字数: 3807字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2009.02.004

摘要

目的:在耻垢分枝杆菌中表达预测的噬菌体D29裂解酶基因片段,鉴定其细胞壁裂解活性.方法:在分析分枝杆菌噬菌体D29开放阅读框序列的基础上,用PCR法从噬菌体D29基因组DNA中扩增出与裂解酶同源性较高的序列gene10,将其克隆入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒后,在耻垢分枝杆菌中进行诱导表达.对表达产物进行SDS-PAGE检测,对诱导培养重组菌进行混浊度测定、透射电镜观察以鉴定其裂解活性.结果及结论:成功构建了重组穿梭质粒pUV-gene10并使gene10在耻垢分枝杆菌中获得表达,表达产物能有效降低宿主菌培养液混浊度,降解宿主菌细胞壁,证实gene10表达产物为噬菌体裂解酶,并推测其为非经典分泌蛋白.