siMDR1重组慢病毒载体的构建及其对A549和A549/DDP细胞的影响

• 作者: 余云生 叶文学 沈振亚 许林 黄建峰 黄浩岳
• 来源期刊: 中国癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: siRNA RNA干扰 多药耐药基因 A549/DDP细胞
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 497-502
• 页数: 6页
• 分类号: R73-36+2
• 字数: 3699字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3639.2009.07.003

摘要

背景与目的:肿瘤细胞的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)是导致化疗失败的最主要原因,也是癌症术后复发及转移的主要原因.本研究旨在探讨MDR1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)重组慢病毒对人肺腺癌A549细胞和对顺铂耐药的A549/DDP细胞的MDR1基因的抑制作用.方法:设计获得针对MDR1的短发卡状RNA(small hair pin RNA,shRNA)的寡核苷酸序列,退火后插入线性化的pSUPER载体(H1启动子下游).把构建获得的载体转染A549细胞,RT-PCR法检测其对MDR1的干扰作用,筛选确定MDR1基因RNAi有效靶序列;合成靶序列的01igo DNA,与含启动子和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的PTM载体连接产生PTM-siMDR1慢病毒载体;用重组慢病毒体外感染A549和A549/DDP细胞.结果:成功构建可以表达针对MDR1的发卡状RNAi,能有效的下调MDR1的表达.成功构建获得针对MDR1基因的慢病毒载体PTM-siMDR1,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为0.5×109TU/mL.感染PTM-siMDRI的A549/DDP细胞对顺铂的敏感性明显提高,逆转倍数达3.81倍.结论:siiDR1重组慢病毒载体感染A549/DDP细胞,能明显改善其对顺铂的耐药性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许林	江苏省肿瘤医院胸外科	104	538	12.0	17.0
2	黄浩岳	苏州大学附属第一医院胸心外科	62	126	5.0	7.0
3	沈振亚	苏州大学附属第一医院胸心外科	276	741	11.0	16.0
4	黄建峰	苏州大学附属第一医院胸心外科	5	4	1.0	1.0
5	余云生	苏州大学附属第一医院胸心外科	84	182	7.0	8.0
6	叶文学	苏州大学附属第一医院胸心外科	76	166	7.0	8.0